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如何使用牛津杯做抑菌試驗/藥敏實驗
發布者: 發布時間:2014-7-30 閱讀:1581

如何使用牛津杯做抑菌試驗/藥敏實驗(杯碟法)

抑菌試驗/藥敏實驗方法主要有兩種,即擴散法和稀釋法。其中擴散法屬手工測試方法,通過測試藥物紙片或者牛津杯在固體培養基上的抑菌圈的大小,判斷細菌對該種藥物是否敏感。

稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法,通過測試細菌在含不同濃度藥物培養基內的生長情況,判斷其最低抑菌濃度(MIC)。

由於擴散法操作簡單,成本低,已經被大多數實驗室和基層單位所采用。擴散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。

一、實驗原理

1、將培養基平板置培養箱中培養,一方麵試驗菌(指示菌)開始生長繁殖;另一方麵抗生素呈球麵擴散,形成遞減的梯度濃度,離杯越近,抗生素濃度越大,離杯越遠抗生素濃度越小。

2、在牛津杯周圍抑菌濃度範圍內的細菌的生長被抑製,形成透明的抑菌圈。

3、抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度(藥敏實驗)或藥物對指示細菌的抑菌程度(抑菌試驗)。

4、抗生素濃度越高,抑菌圈越大。

5、在抑菌圈的邊緣處,瓊脂培養基中所含抑菌物質的濃度即為該菌懸液中對該種指示菌的最低抑菌濃度(MIC

6、抑菌圈直徑與藥物對測試菌的最低抑菌濃度 呈負相關,即抑菌圈愈大,MIC愈小。

二、實驗材料

培養基:牛肉膏蛋白腖固體培養基

菌種:大腸杆菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

藥品:阿莫西林、黃芪多糖、

其他:牛津杯、培養皿、酒精棉、酒精燈、塗布器、移液槍、1mL200uL槍頭、恒溫培養箱、超淨工作台、接種環

牛津杯”可從東台市吉泰不鏽鋼製品廠采購,牛津杯是內徑為6mm,外徑為8mm,高10mm的圓筒形管子,管子的重量盡可能相等。

三、實驗操作

1. 倒平板:將已滅菌的瓊脂培養基加熱到完全融化,倒在培養皿內,每皿約20ml,凝固。

2. 標記:菌種、牛津杯擺放位置、藥物及其 濃度

3. 製備菌懸液:用生理鹽水洗下試管內的菌苔並稀釋。

4. 菌液塗布:吸取1mL 菌液入平板表麵,用塗布器塗布將菌液塗布均勻

5. 擺放牛津杯:在培養基表麵垂直擺放牛津杯,輕輕加壓,使其與培養基接觸無空隙。

6.加入待檢藥液:在杯中加入不同稀釋度的藥液或待檢樣品。

7. 孵育:加滿後在37 ℃培養16~18 h

8. 結果報告:用毫米尺量取抑菌圈直徑,參考表的標準判讀結果,按敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)報

以牛津杯周圍沒有肉眼可見生長物區域為抑菌圈,根據抑菌圈直徑大小判斷細菌對抗菌藥的敏感性。

抑菌試驗結果判定標準:抑菌圈直徑(毫米)

20極敏感

15-20高敏感

10-14中敏感

10低敏感

 0不敏感

四、注意事項

1.         在超淨工作台中或酒精燈旁操作

2.         平板倒好,一定要平

3.         牛津杯立直,才能保證杯內抑菌物質均勻的向四周擴散

4.         牛津杯均勻擺放於培養基上,位置安排適中,防止出現抑製圈重疊,可在平皿中央擺一個,外周等距離擺56個。

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